動物疫病血凝分析儀DY-7000

動物疫病血凝分析儀型號：DY-7000

廣泛于動物疫病預防控制中心、動物防疫監督所、獸醫藥品監察所、獸醫研究所、大學、疫苗生產和大中型飼養企業等單位。
DY-7000動物疫病血凝分析儀是根據國標中重大疫病免疫監測方法研制的設備，配套使用自動血凝分析管理軟件，能自動監測常見重大動物疫病的免疫抗體效價，及時掌握動物疫病流行規律和疫情動態，建立動物免疫效果監測記錄檔案。系統當前監測項目有：豬瘟抗體正向間接血凝檢測、口蹄疫抗體正向間接血凝檢測、致病性禽流感H5亞型抗體血凝抑制檢測、致病性禽流感H7亞型抗體血凝抑制檢測、致病性禽流感H9亞型抗體血凝抑制檢測、新城疫抗體血凝抑制檢測。

試驗方法：
1 血凝（HA）試驗
1） 在V型微量反應板的1～12孔均孔加入0.025ml PBS，換滴頭。
2） 吸取0.025ml血凝抗原加入孔，混勻。
3） 從第1孔吸取0.025ml血凝抗原加入第2孔，混勻后吸取0.025ml加入第3孔，如此進行對倍稀釋至第11孔，從第11孔吸取0.025ml棄去，換滴頭。
4） 每孔再加0.025ml PBS。
5） 每孔均加入0.025ml 1%（V/V）雞紅細胞懸液（將雞紅細胞懸液充分搖勻后加入）。
6） 將反應板在振蕩器上震蕩1～2分鐘或輕扣反應板混合反應物，在室溫（20～25℃）下靜置40分鐘后觀察結果，（如果環境溫度太高，可置4℃環境下），在對照孔紅細胞顯著呈鈕扣狀時判定結果。
7） 結果判定  將板傾斜，觀察紅細胞有無呈淚滴狀流淌。*血凝（不流淌）的抗原或病毒稀釋倍數代表一個血凝單位（HAU）。
2  血凝抑制（HI）試驗
1） 根據HA試驗測定的效價，計算配制4個血凝單位(4HAU)抗原。以*血凝的病毒稀釋倍數作為終點，終點稀釋倍數除以4即為含4HAU抗原的稀釋倍數。例如，HA效價為1:256，則4HAU抗原的稀釋倍數應是1:64（256除以4）。
2） 加稀釋液：
在微量反應板的第1～11孔加入0.025ml PBS，第12孔加入0.05ml PBS。
3） 稀釋待檢血清：
取1號待檢血清0.025ml加入排第1孔，充分混勻后吸0.025ml于第2孔，依次對倍稀釋至第10孔，從第10孔吸取0.025ml棄去。
取2號待檢血清加入第2排；取3號待檢血清加入第3排……均按上法稀釋。
  注意！每取一份血清時，必須更換吸頭。
4） 稀釋陰性血清：
  在血凝板的第7排孔加陰性血清0.025ml，對倍稀釋至第3孔，混勻后從該孔取出0.025ml棄去。
    5） 稀釋陽性血清：
  在血凝板的第8排第1孔加陽性血清0.025ml，對倍稀釋至第10孔，混勻后從該孔取出0.025ml棄去。
6） 第1～11孔均加入含4HAU混勻的病毒抗原液0.025ml，在室溫（20～25℃）下靜置30分鐘或2～8℃ 50分鐘。
7） 每孔加入0.025ml 1%（V/V）的雞紅細胞懸液，震蕩混勻，在室溫（20～25℃）下靜置20～30分鐘或2～8℃ 45～60分鐘，對照紅細胞將呈明顯鈕扣狀沉于孔底。
結果判定 
以*抑制4 HAU抗原的血清稀釋倍數判為該血清的HI效價。
只有陰性對照孔血清滴度不大于2log2，陽性對照血清誤差不過1個滴度，試驗結果才有效。
禽流感滅活疫苗的免疫效果判定：家禽免疫后21天進行免疫效果監測。禽流感抗體血凝抑制（HI）抗體效價≥24判定為合格
存欄家禽抗體合格率達到≥70%判定為合格。
新城疫免疫效果監測：免疫21天后，進行免疫效果監測。抗體血凝抑制試驗抗體效價≥25判定為合格
存欄家禽抗體合格率達到≥70%判定為合格。

【注意事項】 
（1）HA和HI試驗影響因素甚多，應嚴格控制試驗條件。每加一試劑或樣品后需更換吸頭，同時應嚴格控制作用溫度和時間。
（2）準確配制紅細胞懸液，使用時應隨時振搖。
（3）用pH值7.0～7.2的PBS作為稀釋液。
（4）抗原和陰、陽性血清若有污染，應廢棄。
（5）準確配制4HAU抗原，使用前需進行滴定，滴定好的抗原應在2小時內用完。
（6）抗原和血清按規定保存。凍干試劑應按規定的體積用PBS溶解。溶解后2～8℃保存不過1個月；可分裝成小包裝，-70℃凍存，隨用隨取。切忌反復凍融。
（7）鴨、鵝以及哺乳動物的血清一般需進行非特異性凝集和抑制素的處理。
（8）同一亞型不同毒株的HI試驗抗原，若抗原性存在差異，則檢測同一血清的HI效價不同。
（9）在使用微量加樣器時，槍頭進入試劑瓶面下約2~3ml深處，不可過深。待槍頭撤出液面后斜貼在試劑瓶的瓶壁上，淌走多余的液體，防止形成液滴滴入凝集板孔中。
（10）雞紅細胞懸液好是現配現用，剩余的放于4℃保存，如果出現溶血現象則不能使用。
（11）每次檢測可只做一份陰陽性血清對照試驗。
（12）試驗完成后好立即上機判讀，否則易出現紅細胞下滑現象。
（13）凍干對照血清和抗原存放于-20℃，溶解過后存放于4℃。